27. pants

RNS ar iekšējo metodi var ekstrahēt šādi:

27.1. 1 g audu parauga homogenizē 1 ml denaturēšanas šķīduma

(4 M guanīdija tiocianāta, 25 mM nātrija citrāta, 0,1 M

2-merkaptoetanola, 0,5 % sarkozila);

27.2. pēc centrifugēšanas supernatantam pievieno vienu μg

rauga RNS, 0,1 ml 2 M nātrija acetāta pH 4 un 1 ml fenola, un 0,2

ml hloroforma/izoamilspirta maisījumu (49/1);

27.3. suspensiju enerģiski sakrata un 15 minūšu atdzesē uz

ledus;

27.4. pēc centrifugēšanas ūdens fāzē esošo RNS ekstrahē ar

fenolu, izgulsnē ar etanolu un atkārtoti suspendē sterilā

ūdenī.

2.2. Grupai

specifiskā reāllaika RT-PCR