Vairogs30. pants
Spēkā · redakcija pārbaudīta 2026-05-18
Praimeru sākotnējā atšķaidījuma koncentrāciju atšķaida
līdz 8 μM darba koncentrācijai (praimera darba atšķaidījums 8
μM), bet zondi atšķaida līdz 50 μM darba koncentrācijai (zondes
darba atšķaidījums 50 μM). Jāsagatavo testa plates izkārtojums un
jāieraksta reāllaika PCR mašīnas programmatūrā. Izmantojot
izkārtojumu par norādi, 2,5 μl no katra praimera darba
atšķaidījuma pievieno katrā iedobē, kur vēlāk pievienos paraugu
RNS, pozitīvo un negatīvo kontroli (praimera galīgajai
koncentrācijai jābūt 1 μM 20 μM RT-PCR maisījuma). Plati tur uz
ledus.
31. 2 μl izolētas RNS (testa paraugiem un pozitīvās kontroles)
vai 2 μl no RNS brīva ūdens negatīvās reakcijas kontrolēs sajauc
ar tiešo un atgriezenisko praimeru maisījumu. Šo maisījumu
denaturē, karsējot 5 minūtes 95 °C temperatūrā un pēc tam vismaz
5 minūtes ātri atdzesē uz ledus.