467. pants

Benzoskābes, 4-hidroksibenzoskābes, sorbīnskābes un

salicilskābes kvantitatīvu noteikšanu veic šādā kārtībā:

467.1. Parauga gatavošana:

467.1.1. Parauga gatavošana, nepievienojot iekšējo standartu,

notiek šādi: iesver 1 g parauga 50 ml stikla mēģenē ar skrūvējamu

vāciņu. Ar pipeti mēģenē iepilina 1,00 ml 2 M sērskābes un 40,0

ml etanola/ūdens maisījuma (atbilstoši šā pielikuma

465.12.apakšpunktam). Pievieno aptuveni 1 g vārķermeņu

(atbilstoši šā pielikuma 466.7.apakšpunktam), noslēdz mēģeni un

spēcīgi krata vismaz vienu minūti, līdz rodas vienmērīga

suspensija. Lai paātrinātu konservantu ekstrakciju etanola fāzē,

liek mēģeni tieši uz piecām minūtēm ūdens vannā, kur uztur 60 °C.

Tūlīt atdzesē mēģeni auksta ūdens strūklā un vienu stundu tur

ekstraktu 5 °C. Izfiltrē ekstraktu caur filtrpapīru. Pārnes

aptuveni 2 ml ekstrakta uz parauga mēģeni. Tur ekstraktu 5 °C un

24 stundās veic kvantitatīvu noteikšanu augstas izšķirtspējas

plānslāņa hromatogrāfijā.

467.1.2. Parauga gatavošana, pievienojot iekšējo standartu,

notiek šādi: ar precizitāti līdz trešajai zīmei aiz komata iesver

1±0,1 g (a grami) parauga 50 ml stikla mēģenē ar skrūvējamu

vāciņu. Ar pipeti mēģenē iepilina 1,00 ml 2 M sērskābes un 30,0

ml etanola/ūdens maisījuma (atbilstoši šā pielikuma

465.12.apakšpunktam). Pievieno aptuveni 1 g vārķermeņu

(atbilstoši šā pielikuma 466.7.apakšpunktam) un 10,00 ml iekšējā

standarta šķīduma (atbilstoši šā pielikuma 465.13.apakšpunktam).

Noslēdz mēģeni un spēcīgi krata vismaz vienu minūti, līdz rodas

vienmērīga suspensija. Lai paātrinātu konservantu ekstrakciju

etanola fāzē, liek mēģeni tieši uz piecām minūtēm ūdens vannā,

kur uztur 60 °C. Tūlīt atdzesē mēģeni auksta ūdens strūklā, un

vienu stundu tur ekstraktu 5 °C. Izfiltrē ekstraktu caur

filtrpapīru. Pārnes aptuveni 2 ml filtrāta uz parauga mēģeni. Tur

filtrātu 5 °C un 24 stundās veic kvantitatīvo noteikšanu augstas

izšķirtspējas plānslāņa hromatogrāfijā.

467.2. Augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfija:

467.2.1. Hromatogrāfijas apstākļi:

467.2.1.1. Kustīgā fāze: acetonitrila/acetāta buferšķīdums

(atbilstoši šā pielikuma 465.15.apakšpunktam).

467.2.1.2. Noregulē kustīgās fāzes plūsmas ātrumu cauri

kolonnai uz 2,0±0,5 ml/minūtē.

467.2.1.3. Detektora viļņu garumu noregulē uz 240 nm.

467.2.2. Kalibrēšana:

467.2.2.1. Ievada katra konservanta standartšķīduma

(atbilstoši šā pielikuma 465.16.apakšpunktam) 10 µl devu šķidruma

hromatogrāfā.

467.2.2.2. Pēc iegūtajām hromatogrammām nosaka konservantu

standartšķīdumu pīķu augstumu attiecības pret iekšējā standarta

pīķa augstumu.

467.2.2.3. Konstruē katra konservanta līkni, attiecinot šīs

attiecības pret standartšķīdumu koncentrācijām.

467.2.2.4. Nosaka, vai, kalibrējot ar standartšķīdumiem,

iegūst lineāru sakarību.

467.2.3. Kvantitatīva noteikšana:

467.2.3.1. Ievada 10 µl parauga ekstrakta (atbilstoši šā

pielikuma 467.1.1.apakšpunktam) šķidruma hromatogrāfā un uzņem

hromatogrammu.

467.2.3.2. Ievada 10 µl viena konservanta standartšķīduma

(atbilstoši šā pielikuma 465.16.apakšpunktam) un uzņem

hromatogrammu.

467.2.3.3. Salīdzina iegūtās hromatogrammas. Ja parauga

ekstrakta (atbilstoši šā pielikuma 467.1.1.apakšpunktam)

hromatogrammā nav neviena pīķa ar aptuveni tādu pašu izdalīšanas

laiku, kāds ir 2-metoksibenzoskābei (ieteicams iekšējais

standarts), šķidruma hromatogrāfā ievada 10 µl parauga ekstrakta,

kam pievienots iekšējais standarts (atbilstoši šā pielikuma

467.1.2.apakšpunktam), un uzņem hromatogrammu. Ja parauga

ekstrakta (atbilstoši šā pielikuma 467.1.1.apakšpunktam)

hromatogrammā ir traucējošas vielas pīķis, kura izdalīšanas laiks

ir aptuveni vienāds ar 2-metoksibenzoskābes pīķa izdalīšanas

laiku, būtu jāizvēlas cits iekšējais standarts (ja kāda

analizējamā konservanta nav parauga hromatogrammā, šo konservantu

var izmantot kā alternatīvu iekšējo standartu).

467.2.3.4. Nosaka, vai iegūtās standartšķīduma un parauga

šķīduma hromatogrammas atbilst šādām prasībām:

467.2.3.4.1. Minimālais divu pīķu atdalījums ir vismaz 0,90

(pīķu atdalījums definēts šī pielikuma 8.attēlā).

8.attēls

Pīķu atdalījums

Ja nav panākts vajadzīgais atdalījums, izmanto efektīvāku

kolonnu vai regulē kustīgās fāzes sastāvu, līdz panāk atbilstību

prasībām.

467.2.3.4.2. Visu iegūto pīķu asimetrijas faktors

As ir 0,9-1,5 (pīķu asimetrijas faktors definēts šī

pielikuma 9.attēlā). Lai uzņemtu hromatogrammu asimetrijas

faktora noteikšanai, ieteicamais pašrakstītāja ātrums ir vismaz 2

cm minūtē.

9.attēls

Pīķu asimetrijas faktors

467.2.3.4.3. Iegūst stabilu bāzes līniju.