475. pants

Propionskābes kvantitatīvu noteikšanu veic šādā

kārtībā:

475.1. Parauga gatavošana:

475.1.1. Parauga gatavošana bez iekšējā standarta:

475.1.1.1. Stikla mēģenē iesver aptuveni 1 g parauga.

475.1.1.2. Pievieno 0,5 ml fosforskābes un 9,5 ml etanola.

475.1.1.3. Noslēdz mēģeni un spēcīgi sakrata. Ja nepieciešams,

lai pilnīgi izšķīstu lipīdu fāze, liek mēģeni uz piecām minūtēm

ūdens vannā, kur ir 60 °C. Ātri atdzesē tekošā ūdenī.

475.1.1.4. Izfiltrē daļu šķīduma ar membrānfiltru.

475.1.1.5. Filtrātam veic hromatogrāfiju tajā pašā dienā.

475.1.2. Parauga gatavošana, pievienojot iekšējo

standartu:

475.1.2.1. Ar precizitāti līdz trešajai zīmei aiz komata

stikla mēģenē iesver 1±0,1 g (a grami) parauga.

475.1.2.2. Pievieno 0,5 ml fosforskābes un 0,50 ml iekšējā

standarta šķīduma un 9 ml etanola.

475.1.2.3. Noslēdz mēģeni un spēcīgi sakrata. Ja nepieciešams,

lai pilnīgi izšķīstu lipīdu fāze, liek mēģeni uz piecām minūtēm

ūdens vannā, kur ir 60 °C. Ātri atdzesē tekošā ūdenī.

475.1.2.4. Izfiltrē daļu šķīduma ar membrānfiltru.

475.1.2.5. Filtrāta hromatogrāfiju veic tajā pašā dienā.

475.2. Veicot gāzu hromatogrāfiju, ieteicami ir šādi darba

apstākļi:

475.2.1. Kolonna:

475.2.1.1. Nerūsējošs tērauds.

475.2.1.2. Garums 2 m.

475.2.1.3. Diametrs 1/8".

475.2.1.4. Pildījums 10 % SP™ 1000 (vai

līdzvērtīgs) + 1 % H3PO4 uz Chromosorb

WAW ar daļiņu izmēru 100-120.

475.2.2. Temperatūra:

475.2.2.1. Inžektors: 200 °C.

475.2.2.2. Kolonna: 120 °C.

475.2.2.3. Detektors: 200 °C.

475.2.2.4. Nesējgāze: slāpeklis.

475.2.2.5. Plūsma: 25 ml/min.

475.3. Hromatogrāfija:

475.3.1. Kalibrēšana:

475.3.1.1. Uz kalibrētām 20 ml kolbām ar pipeti attiecīgi

pārnes 0,25, 0,50, 1,00, 2,00 un 4,00 ml propionskābes šķīduma

(atbilstoši šā pielikuma 473.5.apakšpunktam).

475.3.1.2. Ar pipeti uz katru mērkolbu pārnes 1,00 ml iekšējā

standarta šķīduma (atbilstoši šā pielikuma 473.6.apakšpunktam),

uzpilda līdz zīmei ar etanolu un sajauc. Tā sagatavotajos

šķīdumos ir e mg/ml 2-metilpropionskābes, kas ir iekšējais

standarts (t.i., 1 mg/ml, ja e = 1000) un p/4, p/2, p, 2p, 4p

mg/ml propionskābes (t.i., 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 4,00 mg/ml, ja

p = 1000).

475.3.1.3. Ievada 1 µl katra šī šķīduma un, atzīmējot

propionskābes/2-metilpropionskābes masas attiecību uz x ass un

attiecīgo pīķu laukumu attiecību uz y ass, iegūst kalibrēšanas

līkni.

475.3.1.4. Katru šķīdumu ievada trīs reizes un aprēķina vidējo

pīķu laukumu attiecību.

475.3.2. Kvantitatīva noteikšana:

475.3.2.1. Ievada 1 µl parauga filtrāta (atbilstoši šā

pielikuma 475.1.1.apakšpunktam).

475.3.2.2. Salīdzina hromatogrammu ar viena standarta šķīduma

hromatogrammu (atbilstoši šā pielikuma 475.3.1.apakšpunktam). Ja

kāda pīķa izdalīšanas laiks ir aptuveni vienāds ar

2-metilpropionskābei atbilstīgo izdalīšanas laiku, tad nomaina

iekšējo standartu. Ja nav nekādu traucējošu faktoru, ievada 1 µl

parauga filtrāta (atbilstoši šā pielikuma 475.1.2.apakšpunktam)

un izmēra propionskābes pīķa un iekšējā standarta pīķa

laukumu.

475.3.2.3. Katru šķīdumu ievada trīs reizes un aprēķina vidējo

pīķu laukumu attiecību.