489. pants

Hidrohinona un tā ēteru kvalitatīvu noteikšanu veic šādā

kārtībā:

489.1. Parauga gatavošana:

489.1.1. Ar precizitāti līdz trešajai zīmei aiz komata 50 ml

mērkolbā iesver 1±0,1 g (a grami) parauga.

489.1.2. Disperģē paraugu 25 mililitros ūdens/metanola

maisījuma (atbilstoši šā pielikuma 487.7.apakšpunktam).

489.1.3. Noslēdz kolbu un spēcīgi krata, līdz rodas vienmērīga

suspensija. Krata vismaz vienu minūti.

489.1.4. Liek kolbu ūdens vannā, kurā uztur 60 °C, lai

paātrinātu ekstrakciju.

489.1.5. Atdzesē kolbu un uzpilda līdz atzīmei ar

ūdeni/metanolu (atbilstoši šā pielikuma 487.7.apakšpunktam).

489.1.6. Izfiltrē ekstraktu caur filtrpapīru.

489.1.7. Pēc ekstrakta sagatavošanas 24 stundās veic

kvantitatīvu noteikšanu augstas izšķirtspējas plānslāņa

hromatogrāfijā.

489.2. Augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfija:

489.2.1. Kustīgās fāzes (atbilstoši šā pielikuma

487.8.apakšpunktam) plūsmas ātrumu noregulē uz 1,0 ml/min un

detektora viļņu garumu uz 295 nm.

489.2.2. Ievada 10 µl parauga šķīduma, ko iegūst saskaņā ar šā

pielikuma 489.1.apakšpunktu, un uzņem hromatogrammu. Izmēra pīķu

laukumus. Kalibrē saskaņā ar šā pielikuma 489.2.3.apakšpunktu.

Salīdzina parauga un standartšķīdumu hromatogrammas. Pēc pīķu

laukumiem un relatīvās signāla attiecības pret masas vienību

(Rf), ko aprēķina saskaņā ar šā pielikuma

489.2.3.apakšpunktu, aprēķina analizējamo vielu koncentrāciju

parauga šķīdumā.

489.2.3. Kalibrēšana:

489.2.3.1. Ievada 10 µl standartšķīduma (atbilstoši šā

pielikuma 487.9.apakšpunktam) un uzņem hromatogramu. Ievada

vairākas reizes, līdz iegūst nemainīgu pīķu laukumu.

489.2.3.2. Nosaka relatīvo signāla attiecību pret masas

vienību RFi:

RFi =

pi/ci, kur

pi - hidrohinona, hidrohinona monometilētera,

hidrohinona monoetilētera vai hidrohinona monobenzilētera pīķu

laukums;

ci - hidrohinona, hidrohinona monometilētera,

hidrohinona monoetilētera vai hidrohinona monobenzilētera

koncentrācija (g/50 ml) standartšķīdumā (atbilstoši šā pielikuma

487.9.apakšpunktam).

489.2.3.3. Nosaka, vai iegūtās standartšķīduma un parauga

šķīduma hromatogrammas atbilst šādām prasībām:

489.2.3.3.1. Minimālais divu pīķu atdalījums ir vismaz 0,90

(pīķu atdalījums definēts šī pielikuma 10.attēlā).

10.attēls

Pīķu atdalījums

Ja nav panākts vajadzīgais atdalījums, būtu vai nu jāizmanto

efektīvāka kolonna, vai arī jāregulē kustīgās fāzes sastāvs, līdz

panākta atbilstība prasībām.

489.2.3.3.2. Visu iegūto pīķu asimetrijas faktors AS ir

0,9-1,5 (pīķu asimetrijas faktors definēts šī pielikuma

11.attēlā). Lai uzņemtu hromatogrammu asimetrijas faktora

noteikšanai, ieteicamais pašrakstītāja ātrums ir vismaz 2 cm

minūtē.

11.attēls

Pīķu asimetrijas faktors

489.2.3.3.3. Iegūst stabilu bāzes līniju.