125. pants

Pārbaudi divdimensiju plānslāņa hromatogrāfijā veic šādā

kārtībā:

125.1. Divdimensiju hromatogrāfijas procedūrā izmanto šādus

papildu standartus un reaģentus:

125.1.1. β·naftols (β·N).

125.1.2. 2-aminofenols (OAP).

125.1.3. 3-aminofenols (MAP).

125.1.4. 4-aminofenols (PAP).

125.1.5. 2-nitro-1,4-fenilēndiamīns (2-NPPD).

125.1.6. 4-nitro-1,2-fenilēndiamīns (4-NOPD).

No katra papildu standarta vai reaģenta sagatavo 0,5 % m/v

šķīdumu saskaņā ar šī pielikuma 122.21.apakšpunktu.

125.2. Papildu attīstošais šķīdinātājs ir

etilacetāta/cikloheksāna/amonjaka šķīdums, 25 % 65:30:0,5

(v/v/v).

125.3. Papildu indikatora sistēma: liek stikla trauku

attīstīšanas kamerā plānslāņa hromatogrāfijai, pievieno apmēram 2

g kristāliskā joda un uzliek kamerai piemērotu vāku.

125.4. Hromatogrāfiju veic šādā kārtībā:

125.4.1. Uz plānslāņu plates (atbilstoši šā pielikuma

123.1.3.apakšpunktam) sorbenta virsmas uzzīmē divas līnijas

(6.attēls).

125.4.2. Slāpekļa atmosfērā (atbilstoši šā pielikuma

123.1.1.apakšpunktam) 1-4 µl ekstrakta (atbilstoši šā pielikuma

124.1.apakšpunktam) klāj sākuma punktā 1 (6.attēls), kas ir 2 cm

no abām malām. Ekstrakta daudzums atkarīgs no plankumu

intensitātes šā pielikuma 124.2.apakšpunktā aprakstītajās

hromatogrammās.

125.4.3. Starp punktu 2 un 3 (6.attēls) sadala oksidējošās

krāsvielas, kas kvalitatīvi noteiktas vai ko uzskata par

kvalitatīvi noteiktām (atbilstoši šā pielikuma

124.2.apakšpunktam) (attālums starp punktiem 1,5 cm). Klāj 2 µl

katra standartšķīduma, izņemot DAP, - to klāj 6 µl. Šo darbību

veic slāpeklī (atbilstoši šā pielikuma 125.4.2.apakšpunktam).

125.4.4. Sākuma punktā 4 un 5 (6.attēls) atkārto šā pielikuma

125.4.3.apakšpunktā minēto darbību un tur plati slāpeklī līdz

hromatogrāfijas beigām (attālums starp punktiem 1,5 cm).

125.4.5. Izskalo hromatogrāfijas kameru ar slāpekli

(atbilstoši šā pielikuma 122.8.apakšpunktam) un iepilda piemērotu

daudzumu attīstošā šķīdinātāja (atbilstoši šā pielikuma

122.22.2.apakšpunktam). Liek plati (atbilstoši šā pielikuma

125.4.4.apakšpunktam) kamerā un tumsā attīsta pirmajā eluācijas

virzienā (6.attēls). Eluē, līdz šķīdinātāja fronte ir sasniegusi

uz plates atzīmēto līniju (apmēram 13 cm).

125.4.6. Izņem plati no kameras un liek hromatogrāfijas

kamerā, kas iepriekš izskalota ar slāpekli, un vismaz 60 minūtes

tvaicē eluentu.

125.4.7. Mēģenē ar iedaļām piemērotu daudzumu eluenta

(atbilstoši šā pielikuma 125.2.apakšpunktam) ieliek kamerā, kas

izskalota ar slāpekli (atbilstoši šā pielikuma

122.8.apakšpunktam). Ieliek kamerā (atbilstoši šā pielikuma

125.4.6.apakšpunktam) plati, kura pagriezta par 90°, un veic

hromatogrāfiju otrā virzienā (arī tumsā), kamēr šķīdinātāja

fronte sasniedz uz sorbenta virsmas uzzīmēto līniju. Izņem plati

no kameras un iztvaicē eluentu gaisā.

125.4.8. Uz 10 minūtēm ieliek plati hromatogrāfijas kamerā ar

joda tvaiku (atbilstoši šā pielikuma 125.3.apakšpunktam) un

interpretē divdimensiju hromatogrammu, izmantojot vienlaicīgi

hromatografēto standartvielu Rf vērtības un krāsas

(Rf vērtības un krāsas norādītas šī pielikuma II

tabulā). Lai iegūtu plankumu maksimālo krāsojumu, hromatogrammu

pēc attīstīšanas pusstundu atstāj gaisā.

125.4.9. Saskaņā ar šā pielikuma 125.4.8.apakšpunktu noteikto

oksidējošo krāsvielu klātbūtni pilnīgi var apstiprināt,

atkārtojot šā pielikuma 125.4.1., 125.4.2., 125.4.3., 125.4.4.,

125.4.5., 125.4.6., 125.4.7. un 125.4.8.apakšpunktā minētās

darbības un sākuma punktā 1 pievienojot šā pielikuma

125.4.2.apakšpunktā minētajam ekstrakta daudzumam 1 µl šā

pielikuma 125.4.8.apakšpunktā minēto standartvielu. Ja,

salīdzinot ar hromatogrammu, kas iegūta saskaņā ar šā pielikuma

125.4.8.apakšpunktu, neatrod nevienu citu plankumu, šā pielikuma

125.4.8.apakšpunktā aprakstītā hromatogrammas interpretācija ir

pareiza.

II tabula

Standartvielu krāsa pēc

hromatogrāfijas un attīstīšanas ar joda tvaiku

Standartvielas

Krāsa pēc attīstīšanas ar

joda tvaiku

R

smilškrāsa

P

brūns

a·N

violets

β·N

bāli brūns

H

violeti brūns

MPD

dzeltenīgi brūns

PPD

violeti brūns

MTD

tumši brūns

PTD

dzeltenīgi brūns

DAP

tumši brūns

OAP

oranžs

MAP

dzeltenīgi brūns

PAP

violeti brūns

2-NPPD

brūns

4-NOPD

oranžs

6.attēls