453. pants

Heksamidīna, dibromheksamidīna, dibrompropamidīna un

hlorheksidīna kvantitatīvu noteikšanu veic šādā kārtībā:

453.1. Gatavojot standarta šķīdumu, izmanto vienu no

konservantiem (atbilstoši šā pielikuma 450.6., 450.7., 450.8. vai

450.9.apakšpunktam), kura nav paraugā iekšējā standarta veidā. Ja

tas nav iespējams, var izmantot triklokarbānu vai

halokarbānu:

453.1.1. Šī pielikuma 452.3.apakšpunktā pierādītā konservanta

0,05 % (m/v) rezerves šķīdums šķīdinātājā I (atbilstoši šā

pielikuma 450.5.1.apakšpunktam).

453.1.2. 0,05 % (m/v) rezerves šķīdums konservanta, kas

izvēlēts kā iekšējais standarts, šķīdinātājā I (atbilstoši šā

pielikuma 450.5.1.apakšpunktam).

453.1.3. Katram pierādītajam konservantam sagatavo četrus

standartšķīdumus, pārnesot uz vairākām 10 ml mērkolbām attiecīgo

konservantu (atbilstoši šā pielikuma 453.1.1.apakšpunktam)

rezerves šķīdumus un attiecīgus daudzumus iekšējā standarta

rezerves šķīduma (atbilstoši šā pielikuma 453.1.2.apakšpunktam)

saskaņā ar šajā punktā norādīto tabulu. Katru kolbu uzpilda līdz

atzīmei ar šķīdinātāju I (atbilstoši šā pielikuma

450.5.1.apakšpunktam) un sajauc.

Standartšķīdums

Iekšējā standarta rezerves

šķīdums

Pierādītā konservanta

rezerves šķīdums

(atbilstoši šā pielikuma

453.1.2.apakšpunktam) pievienotie ml

(atbilstoši šā pielikuma

453.1.1.apakšpunktam) pievienotie ml

μg/ml (*)

I

1,0

0,5

25

II

1,0

1,0

50

III

1,0

1,5

75

IV

1,0

2,0

100

(*) Šīs vērtības atbilst pierādīto konservantu

koncentrācijai standartšķīdumos, kas gatavoti, izmantojot

rezerves šķīdumu, kas satur tieši 0,05 % pierādītā

konservanta.

453.2. Parauga sagatavošana:

453.2.1. Precīzi iesver aptuveni 0,5 g (p gramus) parauga 10

ml mērkolbā, pievieno 1,0 ml iekšējā standarta šķīduma

(atbilstoši šā pielikuma 453.1.2.apakšpunktam) un 6 ml

šķīdinātāja I (atbilstoši šā pielikuma 450.5.1.apakšpunktam) un

sajauc.

453.2.2. Kolbu uz 10 minūtēm ieliek ultraskaņas vannā.

Atdzesē. Uzpilda līdz atzīmei ar šķīdinātāju I un sajauc.

Centrifugē vai filtrē caur kroku filtrpapīru. Savāc attiecīgi

centrifugātu vai filtrātu hromatogrāfijai.

453.3. Hromatogrāfija:

453.3.1. Noregulē mobilās fāzes gradientu, plūsmas ātrumu,

kolonnas temperatūru un HPLC iekārtas detektora viļņu

garumu atbilstīgi nosacījumiem pierādīšanas stadijā (atbilstoši

šā pielikuma 452.2.1., 452.2.2. un 452.2.3.apakšpunktam).

453.3.2. Iesmidzina 10 ml paraugšķīduma (atbilstoši šā

pielikuma 453.2.2.apakšpunktam) un izmēra pīķu laukumus. Šo

procedūru atkārto ar parauga šķīduma 10 ml alikvotām daļām, līdz

iegūst konsekventus rezultātus. Aprēķina tā pīķa laukuma, kas

radies no analizējamā savienojuma, attiecību pret tā pīķa

laukumu, ko rada iekšējais standarts.

453.4. Kalibrēšana:

453.4.1. Iesmidzina 10 ml no katra standartšķīduma (atbilstoši

šā pielikuma 453.1.3.apakšpunktam) un izmēra pīķu laukumus.

453.4.2. Atbilstīgi katram standartšķīdumam (atbilstoši šā

pielikuma 453.1.3.apakšpunktam) aprēķina heksamidīna,

dibromheksamidīna, dibrompropamidīna vai hlorheksidīna pīķu

laukuma attiecību pret iekšējā standarta pīķu laukumu. Uzzīmē

kalibrēšanas līkni, šīs attiecības izmantojot par ordinātu un

attiecīgās kvalitatīvi noteiktā konservanta koncentrācijas

standartšķīdumos mikrogramos uz mililitru - par abscisu.

453.4.3. No kalibrēšanas līknes (atbilstoši šā pielikuma

453.4.2.apakšpunktam) nolasa pierādītā konservanta koncentrāciju,

kas atbilst pīķu laukumu attiecībai, kas aprēķināta saskaņā ar šā

pielikuma 453.3.2.apakšpunktu.